Ang Phosphorylation nagpalihok sa master growth regulator DELLA sa Arabidopsis pinaagi sa pagpasiugda sa asosasyon sa histone H2A nga adunay chromatin.

Ang mga protina sa DELLA gitipigan nga mastermga regulator sa pagtubonga adunay mahinungdanong papel sa pagkontrolar sa paglambo sa tanom isip tubag sa internal ug environmental nga mga ilhanan. Ang DELLA naglihok isip transcriptional regulator ug gi-recruit aron ma-target ang mga tigpasiugda pinaagi sa pagbugkos sa transcription factor (TFs) ug histone H2A pinaagi sa GRAS domain niini. Gipakita sa bag-ong mga pagtuon nga ang kalig-on sa DELLA gi-regulate sa post-translationally pinaagi sa duha ka mga mekanismo: polyubiquitination nga gipahinabo sa phytohormone gibberellin, nga mosangpot sa paspas nga pagkadaot niini, ug ang conjugation sa gagmay nga ubiquitin-like modifiers (SUMO) aron madugangan ang pagtipon niini. Dugang pa, ang kalihokan sa DELLA dinamikong gi-regulate sa duha ka lainlaing glycosylations: ang interaksiyon sa DELLA-TF gipauswag sa O-fucosylation apan gipugngan sa O-linked N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) nga pagbag-o. Bisan pa, ang papel sa DELLA phosphorylation nagpabilin nga dili klaro, tungod kay ang miaging mga pagtuon nagpakita sa nagkasumpaki nga mga resulta, gikan sa mga nagpakita nga ang phosphorylation nagpasiugda o nagpamenos sa DELLA degradation ngadto sa uban nga nagpakita nga ang phosphorylation dili makaapekto sa kalig-on niini. Dinhi, nahibal-an namon ang mga site sa phosphorylation sa REPRESSORga1-3(RGA, AtDELLA) giputli gikan sa Arabidopsis thaliana pinaagi sa mass spectrometry analysis ug nagpakita nga ang phosphorylation sa duha ka RGA peptides sa PolyS ug PolyS/T nga mga rehiyon nagpasiugda sa H2A nga nagbugkos ug nagpalambo sa kalihokan sa RGA. Asosasyon sa RGA nga adunay mga target nga tigpasiugda. Ilabi na, ang phosphorylation wala makaapekto sa mga interaksyon sa RGA-TF o kalig-on sa RGA. Gipadayag sa among pagtuon ang mekanismo sa molekula diin ang phosphorylation nag-aghat sa kalihokan sa DELLA.
Aron mapatin-aw ang papel sa phosphorylation sa pag-regulate sa function sa DELLA, hinungdanon nga mahibal-an ang mga site sa phosphorylation sa DELLA sa vivo ug himuon ang pag-analisar sa mga tanum. Pinaagi sa affinity purification sa mga extract sa tanom nga gisundan sa MS/MS analysis, among giila ang daghang phosphosite sa RGA. Ubos sa mga kondisyon sa kakulangan sa GA, ang RHA phosphorylation nagdugang, apan ang phosphorylation dili makaapekto sa kalig-on niini. Importante, ang co-IP ug ChIP-qPCR assays nagpadayag nga ang phosphorylation sa PolyS / T nga rehiyon sa RGA nagpasiugda sa interaksyon niini sa H2A ug ang pagpakig-uban niini sa mga target nga tigpasiugda, nga nagpadayag sa mekanismo diin ang phosphorylation nag-aghat sa RGA function.
Ang RGA gi-recruit aron ma-target ang chromatin pinaagi sa interaksyon sa LHR1 subdomain sa TF ug dayon igapos sa H2A pinaagi sa PolyS/T nga rehiyon ug PFYRE subdomain, nga magporma sa H2A-RGA-TF complex aron mapalig-on ang RGA. Ang Phosphorylation sa Pep 2 sa PolyS / T nga rehiyon tali sa DELLA domain ug sa GRAS domain pinaagi sa usa ka wala mailhi nga kinase nagpalambo sa RGA-H2A nga pagbugkos. Ang rgam2A mutant nga protina nagwagtang sa RGA phosphorylation ug nagsagop sa usa ka lain-laing mga protina conformation aron makabalda sa H2A binding. Kini moresulta sa destabilization sa lumalabay nga TF-rgam2A nga mga interaksyon ug dissociation sa rgam2A gikan sa target nga chromatin. Kini nga numero naghulagway lamang sa RGA-mediated transcriptional repression. Ang usa ka susama nga sumbanan mahimong ihulagway alang sa RGA-mediated transcriptional activation, gawas nga ang H2A-RGA-TF complex magpasiugda sa target nga transcription sa gene ug dephosphorylation sa rgam2A nga makapakunhod sa transkripsyon. Figure giusab gikan sa Huang et al.21.
Ang tanan nga quantitative data gisusi sa istatistika gamit ang Excel, ug ang mahinungdanong mga kalainan gitino gamit ang Student's t test. Wala'y gigamit nga mga pamaagi sa istatistika aron mahibal-an ang gidak-on sa sample. Walay datos nga wala iapil sa pagtuki; ang eksperimento dili random; ang mga tigdukiduki dili buta sa pag-apod-apod sa datos sa panahon sa eksperimento ug sa pagtimbang-timbang sa mga resulta. Ang sampol nga gidak-on gipakita sa leyenda sa numero ug tinubdan sa datos nga file.
Alang sa dugang nga impormasyon bahin sa disenyo sa pagtuon, tan-awa ang Natural Portfolio Report Abstract nga nalangkit niini nga artikulo.
Ang datos sa mass spectrometry proteomics natampo sa ProteomeXchange consortium pinaagi sa PRIDE66 partner repository nga adunay dataset identifier PXD046004. Ang tanan nga ubang mga datos nga nakuha sa kini nga pagtuon gipresentar sa Supplementary Information, Supplementary Data Files, ug Raw Data Files. Ang tinubdan data gihatag alang niini nga artikulo.