Mga materyales sa tanum ug pathogen
Usa ka sorghum association mapping population nga nailhan nga sorghum conversion population (SCP) gihatag ni Dr. Pat Brown sa University of Illinois (karon sa UC Davis).Gihulagway kini kaniadto ug usa ka koleksyon sa lain-laing mga linya nga nakabig ngadto sa photoperiod-insensitivity ug mas gamay nga gidak-on aron mapadali ang pagtubo ug paglambo sa mga tanum sa mga palibot sa US.510 ka linya gikan niini nga populasyon ang gigamit niini nga pagtuon bisan pa tungod sa dili maayo nga pagtubo ug uban pang mga isyu sa pagkontrol sa kalidad, dili tanang linya ang gigamit sa pagtuki sa tanang tulo ka kinaiya.Sa katapusan ang datos gikan sa 345 ka linya gigamit alang sa pagtuki sa tubag sa chitin, 472 ka linya alang sa tubag sa flg22, ug 456 alang sa pagsukol sa TLS.B. cookeiAng strain nga LSLP18 nakuha gikan kang Dr. Burt Bluhm sa University of Arkansas.
Pagsukod sa tubag sa MAMP
Duha ka lainlaing MAMP ang gigamit sa kini nga pagtuon flg22, (Genscript catalog # RP19986), ug chitin.Ang mga tanom nga sorghum gipatubo sa mga insert nga gibutang sa mga patag nga puno sa yuta (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) sa greenhouse.Gibisbisan ang mga tanum usa ka adlaw sa wala pa ang pagkolekta sa sample aron malikayan ang sobra nga kaumog sa dahon sa adlaw sa pagkolekta.
Ang mga linya randomized ug, alang sa logistical nga mga hinungdan, gitanom sa mga batch sa 60 ka linya.Sa matag linya, tulo ka 'kaldero' ang gitanom nga adunay duha ka liso matag linya.Ang sunod nga mga batch gitanom sa diha nga ang miaging batch naproseso hangtud nga ang tibuok populasyon masusi.Duha ka eksperimento nga dagan ang gihimo alang sa duha ka MAMP nga adunay genotype nga gi-random sa matag usa sa duha ka dagan.
Ang mga pagsulay sa ROS gihimo sama sa gihulagway kaniadto.Sa makadiyot, alang sa matag linya, unom ka liso ang gitanom sa 3 ka lain-laing kaldero.Gikan sa resulta nga mga semilya, tulo ang gipili base sa pagkaparehas.Ang mga semilya nga dili kasagaran tan-awon o mas taas o mas mubo kaysa kadaghanan wala gigamit.Upat ka mga dahon nga disc nga 3 mm ang diyametro ang gikuha gikan sa pinakalapad nga bahin sa ika-upat nga dahon sa tulo ka lain-laing 15 ka adlaw nga sorghum nga tanum.Usa ka disc matag dahon gikan sa duha ka tanum ug duha ka disc gikan sa usa ka tanum, nga ang ikaduha nga disc mahimong kontrol sa tubig (tan-awa sa ubos).Ang mga disc tagsa-tagsa nga gipalutaw sa 50 µl H20 sa usa ka itom nga 96-well plate, gitakpan sa usa ka aluminum seal aron malikayan ang pagkaladlad sa kahayag, ug gitipigan sa temperatura sa lawak sa tibuok gabii.Pagkasunod buntag usa ka reaksyon nga solusyon gihimo gamit ang 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, catalog # 120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Type VI-A, Sigma-Aldrich, catalog # P6782), ug 100 mg/ml Chitin o 2 μM sa Flg22.Ang 50 µl niini nga solusyon sa reaksyon gidugang sa tulo sa upat ka atabay.Ang ikaupat nga atabay usa ka mock control, diin gidugang ang reaksyon nga solusyon gawas sa MAMP.Upat ka blangko nga atabay nga adunay sulod lamang nga tubig ang gilakip usab sa matag plato.
Human sa pagdugang sa reaksyon nga solusyon, ang luminescence gisukod gamit ang SynergyTM 2 multi-detection microplate reader (BioTek) matag 2 min sa 1 ka oras.Ang plate reader mokuha ug luminescence measurements matag 2 min sulod niining 1 ka oras.Ang sumada sa tanan nga 31 nga mga pagbasa gikalkula aron mahatagan ang kantidad sa matag atabay.Ang gibanabana nga kantidad alang sa tubag sa MAMP alang sa matag genotype gikalkulo ingon (aberids nga kantidad sa luminescence sa tulo nga mga eksperimento nga atabay-ang kantidad nga mock well) -minus ang kasagaran nga kantidad sa blangko nga atabay.Ang blangko nga mga kantidad sa atabay kanunay nga hapit sa zero.
Mga disc sa dahon saNicotiana benthamiana, usa ka taas nga responsive sorghum line (SC0003), ug usa ka ubos nga responsive sorghum line (PI 6069) gilakip usab isip mga kontrol sa matag 96-well plate alang sa kalidad nga pagkontrol sa mga katuyoan.
B. cookeipag-andam sa inoculum ug inoculation
B. cookeiAng inoculum giandam sama sa gihulagway kaniadto.Sa makadiyot, ang mga lugas sa sorghum gituslob sa tubig sulod sa tulo ka adlaw, gihugasan, gi-scoop sa 1L conical flasks ug gi-autoclave sulod sa usa ka oras sa 15psi ug 121 °C.Ang mga lugas dayon gisudlan sa mga 5 ml nga macerated mycelia gikan sa usa ka lab-as nga kultura saB. cookeiAng LSLP18 gilain ug gibilin sulod sa 2 ka semana sa temperatura sa lawak, pag-uyog sa flasks matag 3 ka adlaw.Human sa 2 ka semana, ang mga lugas sa sorghum nga nataptan sa fungus gipauga sa hangin ug dayon gitipigan sa 4 °C hangtod sa inoculation sa uma.Ang parehas nga inoculum gigamit alang sa tibuuk nga pagsulay ug gihimo nga presko matag tuig.Alang sa inoculation, 6-10 ka mga lugas nga nataptan ang gibutang sa whorl sa 4-5 ka semana nga mga tanum nga sorghum.Ang mga spores nga gihimo gikan niini nga mga fungi nagsugod sa impeksyon sa mga batan-ong tanum nga sorghum sulod sa usa ka semana.
Pag-andam sa binhi
Sa wala pa itanom sa umahan ang liso sa sorghum gitambalan sa fungicide, insecticide, ug safener mixture nga adunay ~ 1% Spirato 480 FS fungicide, 4% Sebring 480 FS fungicide, 3% Sorpro 940 ES seed safener.Dayon ang mga liso gipauga sa hangin sulod sa 3 ka adlaw nga naghatag ug nipis nga taklap niini nga sagol palibot sa mga liso.Gitugotan sa safener ang paggamit sa herbicide nga Dual Magnum isip usa ka pre-emergence treatment.
Ebalwasyon sa Target nga Leaf Spot nga pagsukol
Ang SCP gitanom sa Central Crops Research Station sa Clayton, NC niadtong Hunyo 14–15 2017 ug Hunyo 20, 2018 sa usa ka randomized complete block design nga adunay duha ka experimental replications sa matag kaso.Ang mga eksperimento gitanom sa 1.8 m single row nga adunay 0.9 m row gilapdon gamit ang 10 ka liso kada plot.Duha ka laray sa utlanan ang gitanom palibot sa periphery sa matag eksperimento aron malikayan ang mga epekto sa kilid.Ang mga eksperimento gi- inoculate niadtong Hulyo 20, 2017 ug Hulyo 20, 2018 diin ang mga tanom nga sorghum anaa sa yugto sa pagtubo 3. Gikuha ang mga rating sa usa ngadto sa siyam ka mga timbangan, diin ang mga tanom nga walay mga timailhan sa sakit gi-iskor isip siyam ug hingpit. ang patay nga mga tanom gi-iskor isip usa .Duha ka rating ang gikuha sa 2017 ug upat ka mga pagbasa sa 2018 sugod duha ka semana human sa inoculation kada tuig.Ang sAUDPC (standardized nga lugar ubos sa curve sa pag-uswag sa sakit) gikalkulo sama sa gihulagway kaniadto.
Oras sa pag-post: Abr-01-2021