Mga materyales sa tanom ug pathogen
Usa ka populasyon sa sorghum association mapping nga nailhan nga sorghum conversion population (SCP) ang gihatag ni Dr. Pat Brown sa University of Illinois (karon naa sa UC Davis). Kini gihulagway na kaniadto ug usa ka koleksyon sa lain-laing mga linya nga gi-convert ngadto sa photoperiod-insensitivity ug mas gamay nga gidak-on aron mapadali ang pagtubo ug paglambo sa mga tanom sa mga palibot sa US. 510 ka linya gikan niini nga populasyon ang gigamit niini nga pagtuon bisan pa tungod sa dili maayo nga pagtubo ug uban pang mga isyu sa pagkontrol sa kalidad, dili tanan nga linya gigamit sa pag-analisar sa tanan nga tulo ka mga kinaiya. Sa katapusan, ang datos gikan sa 345 ka linya gigamit alang sa pag-analisar sa tubag sa chitin, 472 ka linya alang sa tubag sa flg22, ug 456 alang sa resistensya sa TLS.B. cookeiAng strain nga LSLP18 nakuha gikan ni Dr. Burt Bluhm sa University of Arkansas.
Pagsukod sa tubag sa MAMP
Duha ka lain-laing MAMP ang gigamit niini nga pagtuon flg22, (Genscript catalog# RP19986), ug chitin. Ang mga tanom nga sorghum gipatubo sa mga insert nga gibutang sa mga patag nga puno sa yuta (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) sa greenhouse. Ang mga tanom gibisbisan sa adlaw sa dili pa ang pagkolekta sa sample aron malikayan ang dugang nga kaumog sa dahon sa adlaw sa pagkolekta.
Ang mga linya gi-randomize ug, tungod sa logistikong mga hinungdan, gitanom sa mga batch nga adunay 60 ka linya. Alang sa matag linya, tulo ka 'paso' ang gitanom nga adunay duha ka liso matag linya. Ang sunod nga mga batch gitanom dayon human maproseso ang miaging batch hangtod nga masusi ang tibuok populasyon. Duha ka eksperimento ang gihimo alang sa duha ka MAMP diin ang mga genotype gi-randomize pag-usab sa matag usa sa duha ka run.
Ang mga ROS assay gihimo sama sa gihulagway kaniadto. Sa laktod nga pagkasulti, alang sa matag linya, unom ka liso ang gitanom sa 3 ka lainlaing mga kaldero. Gikan sa resulta nga mga semilya, tulo ang gipili base sa pagkaparehas. Ang mga semilya nga talagsaon tan-awon o mas taas o mas mubo kaysa kadaghanan wala gigamit. Upat ka leaf disc nga 3 mm ang diyametro ang gikuha gikan sa pinakalapad nga bahin sa ika-4 nga dahon sa tulo ka lainlaing 15 ka adlaw nga sorghum nga mga tanom. Usa ka disc matag dahon gikan sa duha ka tanom ug duha ka disc gikan sa usa ka tanom, diin ang ikaduha nga disc mahimong kontrol sa tubig (tan-awa sa ubos). Ang mga disc tagsa-tagsa nga gipalutaw sa 50 µl H20 sa usa ka itom nga 96-well plate, giselyohan og aluminum seal aron malikayan ang pagkaladlad sa kahayag, ug gibutang sa temperatura sa kwarto sa tibuok gabii. Pagkasunod buntag, usa ka solusyon sa reaksyon ang gihimo gamit ang 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, catalog # 120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Type VI-A, Sigma-Aldrich, catalog # P6782), ug 100 mg/ml Chitin o 2 μM sa Flg22. 50 µl niining solusyon sa reaksyon ang gidugang sa tulo sa upat ka atabay. Ang ikaupat nga atabay usa ka mock control, diin gidugang ang solusyon sa reaksyon nga wala gilakip ang MAMP. Upat ka blangko nga atabay nga adunay tubig lamang ang gilakip usab sa matag plato.
Human sa pagdugang sa reaction solution, ang luminescence gisukod gamit ang SynergyTM 2 multi-detection microplate reader (BioTek) matag 2 ka minuto sulod sa 1 ka oras. Ang plate reader mokuha og mga sukod sa luminescence matag 2 ka minuto sulod niining 1 ka oras. Ang sumada sa tanang 31 ka pagbasa gikalkulo aron mahatag ang bili sa matag atabay. Ang gibanabana nga bili sa MAMP response para sa matag genotype gikalkulo isip (average luminescence value sa tulo ka experimental wells—ang mock well value) -minus ang average blank well value. Ang mga bili sa blank well kanunay nga duol sa zero.
Mga disc sa dahon saNicotiana benthamiana, usa ka high responsive sorghum line (SC0003), ug usa ka low responsive sorghum line (PI 6069) ang gilakip usab isip mga kontrol sa matag 96-well plate para sa katuyoan sa pagkontrol sa kalidad.
B. cookeipag-andam ug pagbakuna sa inoculation
B. cookeiAng inoculum giandam sama sa gihulagway kaniadto. Sa laktod nga pagkasulti, ang mga lugas sa sorghum gihumol sa tubig sulod sa tulo ka adlaw, gihugasan, gisandok sa 1L nga conical flasks ug gi-autoclave sulod sa usa ka oras sa 15psi ug 121 °C. Ang mga lugas gi-inoculate dayon og mga 5 ml nga macerated mycelia gikan sa presko nga kultura saB. cookeiAng LSLP18 isolates ug gipasagdan sulod sa 2 ka semana sa temperatura sa kwarto, uyoga ang mga flasks matag 3 ka adlaw. Human sa 2 ka semana, ang mga lugas sa sorghum nga gisudlan og fungus gipauga sa hangin ug dayon gitipigan sa 4 °C hangtod nga mabakunahan sa uma. Ang parehas nga inoculum gigamit sa tibuok pagsulay ug gihimo nga presko matag tuig. Alang sa pagbakuna, 6-10 ka lugas nga gisudlan og fungus ang gibutang sa whorl sa 4-5 ka semana nga mga tanom nga sorghum. Ang mga spore nga gihimo gikan niining mga fungi nagsugod sa impeksyon sa mga batan-ong tanom nga sorghum sulod sa usa ka semana.
Pag-andam sa liso
Sa dili pa itanom sa uma, ang liso sa sorghum gitambalan og fungicide, insecticide, ug safener mixture nga adunay sulod nga ~ 1% Spirato 480 FS fungicide, 4% Sebring 480 FS fungicide, ug 3% Sorpro 940 ES seed safener. Dayon ang mga liso gipauga sa hangin sulod sa 3 ka adlaw aron makahatag og nipis nga tabon sa palibot sa mga liso. Ang safener nagtugot sa paggamit sa herbicide nga Dual Magnum isip pre-emergence treatment.
Ebalwasyon sa resistensya sa Target Leaf Spot
Ang SCP gitanom sa Central Crops Research Station sa Clayton, NC niadtong Hunyo 14–15, 2017 ug Hunyo 20, 2018 sa usa ka randomized complete block design nga adunay duha ka experimental replications sa matag kaso. Ang mga eksperimento gitanom sa 1.8 m nga single rows nga adunay 0.9 m nga row width gamit ang 10 ka liso kada plot. Duha ka border rows ang gitanom sa palibot sa matag eksperimento aron malikayan ang mga epekto sa ngilit. Ang mga eksperimento gi-inoculate niadtong Hulyo 20, 2017 ug Hulyo 20, 2018 diin ang mga tanom nga sorghum naa sa growth stage 3. Ang mga rating gikuha sa usa ngadto sa siyam ka scale, diin ang mga tanom nga walay mga timailhan sa sakit gi-iskor isip siyam ug ang hingpit nga patay nga mga tanom gi-iskor isip usa. Duha ka rating ang gikuha sa 2017 ug upat ka readings sa 2018 sugod duha ka semana human sa inoculation matag tuig. Ang sAUDPC (standardized area under disease progression curve) gikalkulo sama sa gihulagway kaniadto.
Oras sa pag-post: Abr-01-2021