Ang pine nematode usa ka quarantine migratory endoparasite nga nailhan nga hinungdan sa grabe nga pagkawala sa ekonomiya sa mga ekosistema sa kalasangan sa pino. Gisusi sa kasamtangang pagtuon ang nematicidal nga kalihokan sa halogenated indoles batok sa mga pine nematode ug ang ilang mekanismo sa aksyon. Ang mga nematicidal nga kalihokan sa 5-iodoindole ug avermectin (positibo nga kontrol) batok sa mga pine nematode parehas ug taas sa ubos nga konsentrasyon (10 μg/mL). Ang 5-iodoindole nakakunhod sa fecundity, reproductive activity, embryonic ug larval mortality, ug locomotor behavior. Ang mga molekular nga interaksyon sa mga ligand nga adunay invertebrate-specific glutamate-gated chloride channel receptor nagsuporta sa ideya nga ang 5-iodoindole, sama sa avermectin, hugot nga nagbugkos sa receptor active site. Ang 5-Iodoindole nag-aghat usab sa lainlaing mga phenotypic deformation sa mga nematode, lakip ang abnormal nga pagkahugno/pagkunhod sa organ ug pagtaas sa vacuolization. Kini nga mga resulta nagsugyot nga ang mga vacuole mahimong adunay papel sa kamatayon nga gipahinabo sa methylation sa nematode. Importante nga ang 5-iodoindole dili makahilo sa duha ka klase sa tanom (repolyo ug labanos). Busa, kini nga pagtuon nagpakita nga ang paggamit sa iodoindole ubos sa mga kondisyon sa palibot makakontrol sa kadaot sa pagkalaya sa pino.
Ang pine wood nematode (Bursaphelenchus xylophilus) nahisakop sa pine wood nematodes (PWN), mga migratory endoparasitic nematodes nga nailhan nga hinungdan sa grabe nga kadaot sa ekolohiya sa mga ekosistema sa kalasangan sa pino1. Ang sakit nga pine wilt (PWD) nga gipahinabo sa pine wood nematode nahimong usa ka seryoso nga problema sa daghang mga kontinente, lakip ang Asya ug Europa, ug sa North America, ang nematode naglaglag sa gipaila nga mga espisye sa pino1,2. Ang pagkunhod sa mga punoan sa pino usa ka dakong problema sa ekonomiya, ug ang posibilidad sa pagkaylap niini sa tibuok kalibutan makapabalaka3. Ang mosunod nga mga espisye sa pino ang kasagarang giatake sa nematode: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, ug Pinus radiata4. Ang pine nematode usa ka seryoso nga sakit nga makapatay sa mga punoan sa pino sulod sa mga semana o bulan human sa impeksyon. Dugang pa, ang mga pag-ulbo sa pine nematode komon sa lainlaing mga ekosistema, mao nga ang padayon nga mga kadena sa impeksyon natukod1.
Ang Bursaphelenchus xylophilus usa ka quarantine plant-parasitic nematode nga nahisakop sa superfamily nga Aphelenchoidea ug clade 102.5. Ang nematode mokaon og fungi ug modaghan sa mga tisyu sa kahoy sa mga punoan sa pino, nga molambo ngadto sa upat ka lain-laing yugto sa larva: L1, L2, L3, L4 ug usa ka hamtong nga indibidwal1,6. Ubos sa mga kondisyon sa kakulang sa pagkaon, ang pine nematode moagi sa usa ka espesyal nga yugto sa larva - dauer, nga mag-parasitize sa iyang vector - ang pine bark beetle (Monochamus alternatus) ug ibalhin ngadto sa himsog nga mga punoan sa pino. Sa himsog nga mga host, ang mga nematode dali nga molalin agi sa mga tisyu sa tanom ug mokaon sa mga parenchymatous cells, nga mosangpot sa daghang mga reaksyon sa hypersensitivity, pagkalaya sa pino ug kamatayon sulod sa usa ka tuig human sa impeksyon1,7,8.
Ang biyolohikal nga pagkontrol sa mga pine nematode dugay nang usa ka hagit, nga ang mga lakang sa quarantine nagsugod pa sa ika-20 nga siglo. Ang kasamtangang mga estratehiya sa pagkontrol sa mga pine nematode nag-una nga naglambigit sa mga kemikal nga pagtambal, lakip ang wood fumigation ug pagtanom og mga nematicide sa mga punoan sa kahoy. Ang labing kasagarang gigamit nga mga nematicide mao ang avermectin ug avermectin benzoate, nga nahisakop sa pamilya sa avermectin. Kini nga mahal nga mga kemikal epektibo kaayo batok sa daghang mga klase sa nematode ug giisip nga luwas sa kalikopan9. Bisan pa, ang balik-balik nga paggamit niini nga mga nematicide gilauman nga makamugna og pressure sa pagpili nga hapit siguradong mosangpot sa pagtungha sa mga resistant nga pine nematode, sama sa napamatud-an alang sa daghang mga peste sa insekto, sama sa Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella ug ang mga nematode nga Trichostrongylus colubriformis ug Ostertagia circumcincta, nga anam-anam nga nakaugmad og resistensya sa avermectins10,11,12. Busa, ang mga sumbanan sa resistensya kinahanglan nga kanunay nga tun-an ug ang mga nematicide kanunay nga gisusi aron makit-an ang alternatibo, epektibo sa gasto ug mahigalaon sa kalikopan nga mga lakang aron makontrol ang PVD. Sa bag-ohay nga mga dekada, daghang mga awtor ang nagsugyot sa paggamit sa mga extract sa tanom, mga essential oil ug mga volatiles isip mga ahente sa pagkontrol sa nematode13,14,15,16.
Bag-ohay lang namong gipakita ang nematicidal nga kalihokan sa indole, usa ka intercellular ug interkingdom signaling molecule, sa Caenorhabditis elegans 17. Ang Indole usa ka kaylap nga intracellular signal sa microbial ecology, nga nagkontrol sa daghang mga gimbuhaton nga makaapekto sa microbial physiology, spore formation, plasmid stability, drug resistance, biofilm formation, ug virulence 18, 19. Ang kalihokan sa indole ug ang mga derivatives niini batok sa ubang pathogenic nematodes wala pa gitun-an. Niini nga pagtuon, among gisusi ang nematicidal nga kalihokan sa 34 ka indoles batok sa pine nematodes ug gipatin-aw ang mekanismo sa aksyon sa labing kusgan nga 5-iodoindole gamit ang microscopy, time-lapse photography, ug molecular docking experiments, ug gisusi ang makahilong epekto niini sa mga tanom gamit ang seed germination assay.
Ang taas nga konsentrasyon (>1.0 mM) sa indole gitaho kaniadto nga adunay epekto sa nematicidal sa mga nematode17. Human sa pagtambal sa B. xylophilus (sinagol nga mga yugto sa kinabuhi) gamit ang indole o 33 ka lainlaing mga derivatives sa indole sa 1 mM, ang mortalidad sa B. xylophilus gisukod pinaagi sa pag-ihap sa buhi ug patay nga mga nematode sa mga grupo sa kontrol ug gitambalan. Lima ka indole ang nagpakita og hinungdanon nga kalihokan sa nematicidal; ang survival sa wala matambali nga grupo sa kontrol kay 95 ± 7% pagkahuman sa 24 oras. Sa 34 ka indole nga gisulayan, ang 5-iodoindole ug 4-fluoroindole sa 1 mM hinungdan sa 100% nga mortalidad, samtang ang 5,6-difluoroindigo, methylindole-7-carboxylate, ug 7-iodoindole hinungdan sa gibana-bana nga 50% nga mortalidad (Talaan 1).
Epekto sa 5-iodoindole sa pagporma sa vacuole ug metabolismo sa pine wood nematode. (A) Epekto sa avermectin ug 5-iodoindole sa hamtong nga lalaking nematode, (B) L1 stage nga mga itlog sa nematode ug (C) metabolismo sa B. xylophilus, (i) ang mga vacuole wala naobserbahan sa 0 ka oras, ang pagtambal miresulta sa (ii) mga vacuole, (iii) pagtapok sa daghang mga vacuole, (iv) paghubag sa mga vacuole, (v) paghiusa sa mga vacuole ug (vi) pagporma sa higanteng mga vacuole. Ang pula nga mga pana nagpakita sa paghubag sa mga vacuole, ang asul nga mga pana nagpakita sa paghiusa sa mga vacuole ug ang itom nga mga pana nagpakita sa higanteng mga vacuole. Scale bar = 50 μm.
Dugang pa, kini nga pagtuon naghulagway usab sa sunod-sunod nga proseso sa kamatayon nga gipahinabo sa methane sa mga pine nematode (Figure 4C). Ang methanogenic nga kamatayon usa ka dili-apoptotic nga matang sa kamatayon sa selula nga nalangkit sa pagtapok sa prominenteng cytoplasmic vacuoles27. Ang mga depekto sa morpolohiya nga naobserbahan sa mga pine nematode daw suod nga nalambigit sa mekanismo sa kamatayon nga gipahinabo sa methane. Ang mikroskopikong eksaminasyon sa lainlaing mga oras nagpakita nga ang higanteng mga vacuole naporma pagkahuman sa 20 ka oras nga pagkaladlad sa 5-iodoindole (0.1 mM). Ang mikroskopikong mga vacuole naobserbahan pagkahuman sa 8 ka oras nga pagtambal, ug ang ilang gidaghanon misaka pagkahuman sa 12 ka oras. Daghang dagkong mga vacuole ang naobserbahan pagkahuman sa 14 ka oras. Daghang nag-fuse nga mga vacuole ang klaro nga makita pagkahuman sa 12-16 ka oras nga pagtambal, nga nagpakita nga ang vacuole fusion mao ang sukaranan sa mekanismo sa kamatayon sa methanogenic. Pagkahuman sa 20 ka oras, daghang higanteng mga vacuole ang nakit-an sa tibuuk nga ulod. Kini nga mga obserbasyon nagrepresentar sa unang taho sa metuosis sa C. elegans.
Sa mga ulod nga gitambalan og 5-iodoindole, naobserbahan usab ang pagtipon ug pagkabungkag sa vacuole (Fig. 5), sama sa gipamatud-an sa pagliko sa ulod ug pagpagawas sa vacuole ngadto sa palibot. Naobserbahan usab ang pagkaguba sa vacuole sa lamad sa kabhang sa itlog, nga kasagaran gipreserbar nga wala madaot sa L2 atol sa pagpusa (Supplementary Fig. S2). Kini nga mga obserbasyon nagsuporta sa kalambigitan sa akumulasyon sa pluwido ug kapakyasan sa osmoregulatory, ingon man ang mabalik nga kadaot sa selula (RCI), sa proseso sa pagporma ug suppuration sa vacuole (Fig. 5).
Nagtuo sa papel sa iodine sa naobserbahan nga pagporma sa vacuole, among gisusi ang nematicidal nga kalihokan sa sodium iodide (NaI) ug potassium iodide (KI). Bisan pa, sa mga konsentrasyon (0.1, 0.5 o 1 mM), wala kini makaapekto sa pagkabuhi sa nematode o sa pagporma sa vacuole (Supplementary Fig. S5), bisan kung ang 1 mM KI adunay gamay nga epekto sa nematicidal. Sa laing bahin, ang 7-iodoindole (1 o 2 mM), sama sa 5-iodoindole, nag-induce sa daghang mga vacuole ug mga deformasyon sa istruktura (Supplementary Fig. S6). Ang duha ka iodoindoles nagpakita sa parehas nga mga kinaiya sa phenotypic sa mga pine nematode, samtang ang NaI ug KI wala. Makaiikag, ang indole wala mag-induce sa pagporma sa vacuole sa B. xylophilus sa mga konsentrasyon nga gisulayan (wala gipakita ang datos). Busa, gikumpirma sa mga resulta nga ang indole-iodine complex ang responsable sa vacuolization ug metabolismo sa B. xylophilus.
Lakip sa mga indoles nga gisulayan para sa nematicidal nga kalihokan, ang 5-iodoindole adunay pinakataas nga slip index nga -5.89 kcal/mol, gisundan sa 7-iodoindole (-4.48 kcal/mol), 4-fluoroindole (-4.33), ug indole (-4.03) (Figure 6). Ang lig-on nga backbone hydrogen bonding sa 5-iodoindole ngadto sa leucine 218 nagpalig-on sa pagbugkos niini, samtang ang tanan nga uban pang indole derivatives nagbugkos sa serine 260 pinaagi sa side chain hydrogen bonds. Lakip sa uban pang gimodelo nga iodoindole, ang 2-iodoindole adunay binding value nga -5.248 kcal/mol, nga tungod sa pangunang hydrogen bond niini sa leucine 218. Ang uban pang nailhan nga mga binding naglakip sa 3-iodoindole (-4.3 kcal/mol), 4-iodoindole (-4.0 kcal/mol), ug 6-fluoroindole (-2.6 kcal/mol) (Supplementary Figure S8). Kadaghanan sa mga halogenated indoles ug indole mismo, gawas sa 5-iodoindole ug 2-iodoindole, nagporma og bond uban sa serine 260. Ang kamatuoran nga ang hydrogen bonding uban sa leucine 218 nagpakita sa episyente nga receptor-ligand binding, sama sa naobserbahan sa ivermectin (Supplementary Fig. S7), nagpamatuod nga ang 5-iodoindole ug 2-iodoindole, sama sa ivermectin, hugot nga mogapos sa active site sa GluCL receptor pinaagi sa leucine 218 (Fig. 6 ug Supplementary Fig. S8). Among gisugyot nga kini nga paggapos gikinahanglan aron mapadayon ang bukas nga istruktura sa pore sa GluCL complex ug nga pinaagi sa hugot nga paggapos sa active site sa GluCL receptor, ang 5-iodoindole, 2-iodoindole, avermectin ug ivermectin sa ingon mapadayon ang bukas nga ion channel ug tugotan ang fluid uptake.
Molecular docking sa indole ug halogenated indole ngadto sa GluCL. Mga oryentasyon sa pagbugkos sa (A) indole, (B) 4-fluoroindole, (C) 7-iodoindole, ug (D) 5-iodoindole ligands ngadto sa aktibong site sa GluCL. Ang protina girepresentahan sa usa ka ribbon, ug ang backbone hydrogen bonds gipakita isip dalag nga tuldok-tuldok nga mga linya. Ang (A′), (B′), (C′), ug (D′) nagpakita sa interaksyon sa katugbang nga mga ligand sa naglibot nga amino acid residues, ug ang side-chain hydrogen bonds gipakita sa pink nga tuldok-tuldok nga mga pana.
Gihimo ang mga eksperimento aron masusi ang makahilong epekto sa 5-iodoindole sa pagtubo sa mga liso sa repolyo ug labanos. Ang 5-iodoindole (0.05 o 0.1 mM) o avermectin (10 μg/mL) adunay gamay o walay epekto sa inisyal nga pagtubo ug pagtungha sa plantlet (Figure 7). Dugang pa, walay nakitang dakong kalainan tali sa rate sa pagtubo sa wala matambali nga mga kontrol ug mga liso nga gitambalan og 5-iodoindole o avermectin. Ang epekto sa paglugway sa taproot ug sa gidaghanon sa mga lateral roots nga naporma dili importante, bisan tuod ang 1 mM (10 ka pilo sa aktibong konsentrasyon niini) sa 5-iodoindole gamay nga nakapahinay sa paglambo sa lateral roots. Kini nga mga resulta nagpakita nga ang 5-iodoindole dili makahilo sa mga selula sa tanom ug dili makabalda sa mga proseso sa paglambo sa tanom sa mga konsentrasyon nga gitun-an.
Epekto sa 5-iodoindole sa pagtubo sa liso. Pagturok, pag-usbong ug pag-ugat sa kilid sa mga liso sa B. oleracea ug R. raphanistrum sa Murashige ug Skoog agar medium nga adunay o walay avermectin o 5-iodoindole. Ang pagtubo natala human sa 3 ka adlaw nga paglumlom sa 22°C.
Kini nga pagtuon nagtaho sa pipila ka mga kaso sa pagpatay sa nematode sa mga indole. Importante, kini ang unang taho sa iodoindole nga nag-induce sa methylation (usa ka proseso nga gipahinabo sa pagtapok sa gagmay nga mga vacuole nga hinay-hinay nga naghiusa ngadto sa higanteng mga vacuole, nga sa ngadto-ngadto mosangpot sa pagkabuak sa lamad ug kamatayon) sa mga dagom sa pino, diin ang iodoindole nagpakita sa hinungdanon nga mga kabtangan sa nematicidal nga susama sa mga komersyal nga nematicide avermectin.
Ang mga Indole gitaho kaniadto nga adunay daghang mga function sa signaling sa mga prokaryote ug eukaryote, lakip ang pagpugong/pagporma sa biofilm, pagkabuhi sa bakterya, ug pathogenicity19,32,33,34. Bag-ohay lang, ang potensyal nga mga epekto sa therapeutic sa mga halogenated indole, indole alkaloid, ug semisynthetic indole derivatives nakadani sa halapad nga interes sa panukiduki35,36,37. Pananglitan, ang mga halogenated indole gipakita nga makapatay sa mga persistent nga selula sa Escherichia coli ug Staphylococcus aureus37. Dugang pa, adunay siyentipikong interes nga tun-an ang kaepektibo sa mga halogenated indole batok sa ubang mga espisye, genera, ug mga gingharian, ug kini nga pagtuon usa ka lakang padulong sa pagkab-ot niini nga katuyoan.
Dinhi, among gisugyot ang usa ka mekanismo alang sa 5-iodoindole-induced lethality sa C. elegans base sa reversible cell injury (RCI) ug methylation (Mga Figure 4C ug 5). Ang mga pagbag-o sa edema sama sa paghubag ug vacuolar degeneration mga timailhan sa RCI ug methylation, nga gipakita isip higanteng mga vacuole sa cytoplasm48,49. Ang RCI makabalda sa produksiyon sa enerhiya pinaagi sa pagkunhod sa produksiyon sa ATP, hinungdan sa pagkapakyas sa ATPase pump, o pagsamok sa mga lamad sa selula ug hinungdan sa paspas nga pag-agos sa Na+, Ca2+, ug tubig50,51,52. Ang mga intracytoplasmic vacuole motumaw sa mga selula sa hayop isip resulta sa akumulasyon sa pluwido sa cytoplasm tungod sa pag-agos sa Ca2+ ug tubig53. Makapainteres, kini nga mekanismo sa kadaot sa selula mabalik kung ang kadaot temporaryo ug ang mga selula magsugod sa paghimo og ATP sulod sa usa ka piho nga yugto sa panahon, apan kung ang kadaot magpadayon o mograbe, ang mga selula mamatay.54 Ang among mga obserbasyon nagpakita nga ang mga nematode nga gitambalan sa 5-iodoindole dili makapahiuli sa normal nga biosynthesis pagkahuman sa pagkaladlad sa mga kondisyon sa stress.
Ang methylation phenotype nga gipahinabo sa 5-iodoindole sa B. xylophilus mahimong tungod sa presensya sa iodine ug sa molecular distribution niini, tungod kay ang 7-iodoindole adunay gamay nga inhibitory effect sa B. xylophilus kaysa 5-iodoindole (Table 1 ug Supplementary Figure S6). Kini nga mga resulta partially consistent sa mga pagtuon ni Maltese et al. (2014), kinsa nagtaho nga ang translocation sa pyridyl nitrogen moiety sa indole gikan sa para- ngadto sa meta-position nagwagtang sa vacuolization, growth inhibition, ug cytotoxicity sa U251 cells, nga nagsugyot nga ang interaksyon sa molekula sa usa ka piho nga active site sa protina kritikal kaayo. Ang mga interaksyon tali sa indole o halogenated indoles ug GluCL receptors nga naobserbahan niini nga pagtuon nagsuporta usab niini nga ideya, tungod kay ang 5- ug 2-iodoindole nakit-an nga mas kusog nga nagbugkos sa GluCL receptors kaysa sa ubang mga indoles nga gisusi (Figure 6 ug Supplementary Figure S8). Ang iodine sa ikaduha o ikalima nga posisyon sa indole nakit-an nga mogapos sa leucine 218 sa GluCL receptor pinaagi sa backbone hydrogen bonds, samtang ang ubang halogenated indoles ug ang indole mismo nagporma og huyang nga side-chain hydrogen bonds nga adunay serine 260 (Figure 6). Busa, among gihunahuna nga ang localization sa halogen adunay importanteng papel sa pag-aghat sa vacuolar degeneration, samtang ang hugot nga paggapos sa 5-iodoindole nagpabilin nga bukas ang ion channel, sa ingon nagtugot sa paspas nga pag-agos sa pluwido ug pagkabungkag sa vacuole. Bisan pa, ang detalyado nga mekanismo sa aksyon sa 5-iodoindole kinahanglan pa nga mahibal-an.
Sa dili pa ang praktikal nga paggamit sa 5-iodoindole, ang makahilong epekto niini sa mga tanom kinahanglan nga analisahon. Ang among mga eksperimento sa pagtubo sa liso nagpakita nga ang 5-iodoindole walay negatibong epekto sa pagtubo sa liso o sa sunod nga mga proseso sa paglambo sa mga konsentrasyon nga gitun-an (Figure 7). Busa, kini nga pagtuon naghatag ug basehan alang sa paggamit sa 5-iodoindole sa ekolohikal nga palibot aron makontrol ang kadaot sa mga pine nematode sa mga punoan sa pino.
Ang mga nangaging report nagpakita nga ang indole-based therapy nagrepresentar sa usa ka potensyal nga pamaagi aron matubag ang problema sa antibiotic resistance ug pag-uswag sa kanser55. Dugang pa, ang mga indole adunay antibacterial, anticancer, antioxidant, anti-inflammatory, antidiabetic, antiviral, antiproliferative ug antituberculosis nga mga kalihokan ug mahimong magsilbing usa ka maayong basehan alang sa pagpalambo sa tambal56,57. Kini nga pagtuon nagsugyot sa unang higayon sa potensyal nga paggamit sa iodine isip usa ka antiparasitic ug anthelmintic agent.
Nadiskobrehan ang Avermectin tulo ka dekada na ang milabay ug nakadaog sa Nobel Prize niadtong 2015, ug ang paggamit niini isip anthelmintic nagpadayon pa. Bisan pa, tungod sa paspas nga pag-uswag sa resistensya sa mga nematode ug mga peste sa insekto sa mga avermectins, gikinahanglan ang usa ka alternatibo, barato, ug mahigalaon sa kalikopan nga estratehiya aron makontrol ang impeksyon sa PWN sa mga punoan sa pino. Kini nga pagtuon nagtaho usab sa mekanismo kung giunsa pagpatay sa 5-iodoindole ang mga nematode sa pino ug nga ang 5-iodoindole adunay ubos nga pagkahilo sa mga selula sa tanom, nga nagbukas sa maayong mga palaaboton alang sa umaabot nga komersyal nga aplikasyon niini.
Ang tanan nga mga eksperimento giaprobahan sa Ethics Committee sa Yeungnam University, Gyeongsan, Korea, ug ang mga pamaagi gihimo subay sa mga giya sa Ethics Committee sa Yeungnam University.
Ang mga eksperimento sa paglumlom sa itlog gihimo gamit ang natukod nga mga pamaagi43. Aron masusi ang mga rate sa paglumlom (HR), ang 1 ka adlaw nga gulang nga mga nematode (gibana-bana nga 100 ka babaye ug 100 ka lalaki) gibalhin sa mga Petri dish nga adunay fungus ug gitugotan nga motubo sulod sa 24 oras. Ang mga itlog gilain dayon ug gitambalan og 5-iodoindole (0.05 mM ug 0.1 mM) o avermectin (10 μg/ml) isip suspensyon sa sterile distilled water. Kini nga mga suspensyon (500 μl; gibana-bana nga 100 ka itlog) gibalhin sa mga atabay sa usa ka 24-well tissue culture plate ug gilumlom sa 22 °C. Ang mga ihap sa L2 gihimo pagkahuman sa 24 oras nga paglumlom apan giisip nga patay kung ang mga selula dili molihok kung gi-stimulate gamit ang usa ka pino nga platinum wire. Kini nga eksperimento gihimo sa duha ka yugto, matag usa adunay unom ka pagbalik-balik. Ang datos gikan sa duha ka eksperimento gihiusa ug gipresentar. Ang porsyento sa HR gikalkulo sama sa mosunod:
Ang mortalidad sa ulod gisusi gamit ang mga pamaagi nga naugmad kaniadto. Ang mga itlog sa nematode gikolekta ug ang mga embryo gi-synchronize pinaagi sa pagpusa sa sterile distilled water aron makamugna og L2 stage larvae. Ang gi-synchronize nga mga ulod (gibana-bana nga 500 ka nematode) gitambalan og 5-iodoindole (0.05 mM ug 0.1 mM) o avermectin (10 μg/ml) ug gipadako sa B. cinerea Petri plates. Human sa 48 ka oras nga incubation sa 22 °C, ang mga nematode gikolekta sa sterile distilled water ug gisusi alang sa presensya sa L2, L3, ug L4 stages. Ang presensya sa L3 ug L4 stages nagpakita sa larval transformation, samtang ang presensya sa L2 stage nagpakita nga walay transformation. Ang mga imahe nakuha gamit ang iRiS™ Digital Cell Imaging System. Kini nga eksperimento gihimo sa duha ka yugto, matag usa adunay unom ka repetitions. Ang datos gikan sa duha ka eksperimento gihiusa ug gipresentar.
Ang pagkahilo sa 5-iodoindole ug avermectin sa mga liso gisusi gamit ang mga pagsulay sa pagtubo sa mga plato sa Murashige ug Skoog agar.62 Ang mga liso sa B. oleracea ug R. raphanistrum unang gihumol sa sterile distilled water sulod sa usa ka adlaw, gihugasan gamit ang 1 ml 100% ethanol, gi-sterilize gamit ang 1 ml 50% commercial bleach (3% sodium hypochlorite) sulod sa 15 minutos, ug gihugasan lima ka beses gamit ang 1 ml sterile nga tubig. Ang mga isterilisadong liso gipislit dayon sa mga plato sa germination agar nga adunay 0.86 g/l (0.2X) nga Murashige ug Skoog medium ug 0.7% bacteriological agar nga adunay o walay 5-iodoindole o avermectin. Ang mga plato gi-incubate dayon sa 22 °C, ug ang mga imahe gikuha human sa 3 ka adlaw nga incubation. Kini nga eksperimento gihimo sa duha ka yugto, nga ang matag usa adunay unom ka pagbalik-balik.
Oras sa pag-post: Pebrero 26, 2025